15 (27) èþëÿ 1834 ñîñòîÿëîñü òîðæåñòâåííîå îòêðûòèå óíèâåðñèòåòà. 18 (30) îêòÿáðÿ 1834 íà äîëæíîñòü ïåðâîãî ðåêòîðà Óíèâåðñèòåòà óòâåðæä¸í ïðîôåññîð Ìèõàèë Ìàêñèìîâè÷.
 ïåðâîì ó÷åáíîì ãîäó (1834-1835) â óíèâåðñèòåòå ðàáîòàë ëèøü îäèí ôèëîñîôñêèé ôàêóëüòåò ñ äâóìÿ îòäåëåíèÿìè: èñòîðèêî-ôèëîëîãè÷åñêèì è ôèçèêî-ìàòåìàòè÷åñêèì. Íà ïåðâûé êóðñ áûëè çà÷èñëåíû 62 ñòóäåíòà è 28 àâãóñòà 1834 ã. â óíèâåðñèòåòå íà÷àëèñü çàíÿòèÿ.
Ïîä ðóêîâîäñòâîì ïðîôåññîðà àðõèòåêòóðû Â. È. Áåðåòòè âîçâåëè îãðîìíûé óíèâåðñèòåòñêèé êîðïóñ (1838—1842). Â 1842 ã. óíèâåðñèòåò ïåðååõàë â íîâîå çäàíèå, ãäå ïîìåùàëñÿ äî 1917 ãîäà.
Óíèâåðñèòåò ïåðâîíà÷àëüíî áûë ó÷ðåæäåí â ñîñòàâå 2-õ ôàêóëüòåòîâ: ôèëîñîôñêîãî (ïîçäíåå ðàçäåë¸ííîãî íà èñòîðèêî-ôèëîëîãè÷åñêèé è ôèçèêî-ìàòåìàòè÷åñêèé) è þðèäè÷åñêîãî.  ïåðâîì ãîäó áûë îòêðûò òîëüêî ôèëîñîôñêèé ôàêóëüòåò.
 1838 ã. ïîëüñêîå äâèæåíèå ïðèâåëî ê âðåìåííîìó çàêðûòèþ óíèâåðñèòåòà è óâîëüíåíèþ èëè ïåðåâîäó ïðîôåññîðîâ è ñòóäåíòîâ ïîëüñêîãî ïðîèñõîæäåíèÿ. ×èñëî ñëóøàòåëåé ñèëüíî ñîêðàòèëîñü; ïîëîâèíà êàôåäð îïóñòåëà è áûëà çàìåùåíà ïîòîì ðóññêèìè èëè íåìöàìè.  1841 ã., âçàìåí óïðàçäíåííîé Âèëåíñêîé ìåäèêî-õèðóðãè÷åñêîé àêàäåìèè, â Êèåâñêîì óíèâåðñèòåòå áûë îòêðûò ìåäèöèíñêèé ôàêóëüòåò.
26 ÿíâàðÿ 1850 ã. óíèâåðñèòåòó áûëî ïðåäïèñàíî ïðèíèìàòü âñåãî 300 "ñâîåêîøòíûõ", òî åñòü îáó÷àâøèõñÿ çà ñâîé ñ÷¸ò, ñòóäåíòîâ (èñêëþ÷åíèå áûëî ñäåëàíî òîëüêî äëÿ Ìåäèöèíñêîãî ôàêóëüòåòà). Ïðè ýòîì ïðåäïî÷òåíèå îòäàâàëîñü òåì êàíäèäàòàì, êîòîðûå, ñîãëàñíî ñ. 3. III òîìà Óñòàíîâëåíèÿ î ñëóæáå ãðàæäàíñêîé èìåëè ïðàâî íà âñòóïëåíèå â ãðàæäàíñêóþ ñëóæáó.  1848—56 ãã. áûëè ïîñòðîåíû àíàòîìè÷åñêèé òåàòð è ìåòåîðîëîãè÷åñêàÿ îáñåðâàòîðèÿ, íà÷àëè ñâîþ äåÿòåëüíîñòü êîìèññèè äëÿ îïèñàíèÿ ãóáåðíèé Êèåâñêîãî ó÷åáíîãî îêðóãà è äëÿ ðàçáîðà äðåâíèõ àêòîâ.
Ïî óñòàâó 1863 ã. â Êèåâñêîì óíèâåðñèòåòå ïîëàãàëîñü 58 ïðîôåññîðîâ è 31 äîöåíò, à â óíèâåðñèòåòå íàñ÷èòûâàëîñü òîëüêî 35 ïðîôåññîðîâ è 5 àäúþíêòîâ, ê òîìó æå 12 ïðîôåññîðîâ íå èìåëè äîêòîðñêîé ñòåïåíè. Äëÿ çàìåùåíèÿ êàôåäð óíèâåðñèòåò ñîçäàë èíñòèòóò ñòèïåíäèàòîâ (1864), ïðèíÿòûé ïîòîì ìèíèñòåðñòâîì íàðîäíîãî ïðîñâåùåíèÿ è äëÿ äðóãèõ óíèâåðñèòåòîâ.  íàó÷íîì îòíîøåíèè íàèáîëåå ïðîèçâîäèòåëüíûì áûë ïåðâûé ïåðèîä, äî 1848 ã., îòìå÷åííûé òðóäàìè Ìàêñèìîâè÷à, Äàíèëîâè÷à, Èâàíèøåâà, Íåâîëèíà, Êåññëåðà, Ìèääåíäîðôà è äð.; çàòåì ó÷åíàÿ ïðîèçâîäèòåëüíîñòü ïðîôåññîðîâ ñèëüíà ïîíèçèëàñü è îæèâèëàñü òîëüêî â 60-õ ãîäàõ. Ñ ýòîãî âðåìåíè (1861) íà÷èíàþò èçäàâàòüñÿ «Óíèâåðñèòåòñêèå Èçâåñòèÿ» è ïðè íèõ «Ñáîðíèê ñî÷èíåíèé ñòóäåíòîâ»; îòêðûâàåòñÿ ðÿä ó÷åíûõ îáùåñòâ, ïîïîëíÿþòñÿ áèáëèîòåêà è êîëëåêöèè, êîòîðûå äî òåõ ïîð îñòàâàëèñü ïî÷òè â òàêîì æå âèäå, â êàêîì áûëè ïåðåâåçåíû èç Êðåìåíöà è Âèëüíî, ó÷ðåæäàþòñÿ íîâûå êàáèíåòû è ëàáîðàòîðèè, ñòðîÿòñÿ çäàíèÿ õèìè÷åñêîé ëàáîðàòîðèè (1873) è êëèíèê (1885).
 1884 ãîäó óíèâåðñèòåò ïðàçäíîâàë 50-ëåòíèé þáèëåé; ïðîèñøåäøèå ïðè ýòîì ñòóäåí÷åñêèå âîëíåíèÿ ïîäàëè ïîâîä ê çàêðûòèþ óíèâåðñèòåòà íà ïîëãîäà. Ïîñëå îòêðûòèÿ âíîâü óíèâåðñèòåòà áûë ââåäåí íîâûé Óñòàâ 1884. ×èñëî ñëóøàòåëåé â óíèâåðñèòåòå ñèëüíî êîëåáàëîñü, íî â îáùåì ïîñòîÿííî âîçðàñòàëî: óíèâåðñèòåò îòêðûëñÿ ïðè 62 ñòóäåíòàõ, â 1838 ã. áûëî 267 ñòóäåíòîâ, ïîñëå çàêðûòèÿ óíèâåðñèòåòà â 1838 ã. — 125, ê 1860 ã. — 1049; â 1863 ã., âñëåäñòâèå ïîëüñêîãî âîññòàíèÿ, áîëüøàÿ ÷àñòü ñòóäåíòîâ-ïîëÿêîâ îñòàâèëà óíèâåðñèòåò è ÷èñëî ñòóäåíòîâ óïàëî äî 476; â 1871 ã. — 940, â 1876 ã. — 613, â 1884 ã. — 1709, â 1894 ã. — 2327.
 êîíöå XIX íà÷àëå XX ââ. ïðè Êèåâñêîì óíèâåðñèòåòå ñîñòîÿò: áèáëèîòåêà ñî ñòóäåí÷åñêèì îòäåëîì (áîëåå ïîëóìèëëèîíà òîìîâ) è öåíòðàëüíûì àðõèâîì äðåâíèõ àêòîâ, 2 îáñåðâàòîðèè — ìåòåîðîëîãè÷åñêàÿ è àñòðîíîìè÷åñêàÿ, 4 ôàêóëüòåòñêèõ êëèíèêè, 3 ãîñïèòàëüíûõ è 3 ïðè ãîðîäñêîé Àëåêñàíäðîâñêîé áîëüíèöå, àíàòîìè÷åñêèé òåàòð, ïàòîëîãîàíàòîìè÷åñêèé èíñòèòóò, áîòàíè÷åñêèé ñàä, 9 ëàáîðàòîðèé è 22 êàáèíåòà. Óíèâåðñèòåò èçäàåò åæåìåñÿ÷íûé æóðíàë: «Óíèâåðñèòåòñêèå Èçâåñòèÿ». Ïðè óíèâåðñèòåòå 5 ó÷åíûõ îáùåñòâ (èñòîðè÷åñêîå Íåñòîðà-ëåòîïèñöà, åñòåñòâîèñïûòàòåëåé, þðèäè÷åñêîå, ôèçèêî-ìàòåìàòè÷åñêîå è àêóøåðñêî-ãèíåêîëîãè÷åñêîå).
 1900 ãîäó ñòóäåíòû âûñòóïèëè â çíàê ïðîòåñòà ïðîòèâ èñêëþ÷åíèÿ èç óíèâåðñèòåòà ó÷àñòíèêîâ ñòóäåí÷åñêîãî ìèòèíãà, â ðåçóëüòàòå êîòîðîãî 183 ñòóäåíòà îòäàëè â ñîëäàòû.
 íîÿáðå 1910 ãîäà â Êèåâå ñîñòîÿëèñü áóðíûå ðàáî÷å-ñòóäåí÷åñêèå äåìîíñòðàöèè â ñâÿçè ñî ñìåðòüþ Ëüâà Òîëñòîãî. Ñðåäè 107 àðåñòîâàííûõ äåìîíñòðàíòîâ — îêîëî ñîòíè ñòóäåíòîâ.  ôåâðàëå 1911 ãîäà îïÿòü ñîñòîÿëàñü âñåðîññèéñêàÿ ñòóäåí÷åñêàÿ çàáàñòîâêà.